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ELISA/Elispot實(shí)驗(yàn)

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酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。分為夾心法,間接法和競(jìng)爭(zhēng)法三種。

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更新時(shí)間:2020-05-14
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酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。分為夾心法,間接法和競(jìng)爭(zhēng)法三種。

 

雙抗夾心是檢測(cè)抗原常用的方法,操作流程:

1.        將特異性抗體與固相載體連接形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)  

2.        加受檢標(biāo)本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合形成固相抗原復(fù)合物,洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)  

3.        加酶標(biāo)抗體:使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合,*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體 

4.        加底物:夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量 

 

 

 

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)(Enzyme-linked Immunospot Assay,ELISPOT)法源自ELISA,又突破傳統(tǒng)ELISA法,是定量ELISA技術(shù)的延伸和新的發(fā)展。原理:用抗體捕獲培養(yǎng)中的細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方式將其表現(xiàn)出來(lái)。

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