多克隆抗體制備能識(shí)別出與免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白，例如當(dāng)未測(cè)試物種中的抗原性質(zhì)未知時(shí)，有時(shí)會(huì)使用多克隆抗體?？勺R(shí)別多個(gè)結(jié)構(gòu)域，即使原始抗原的一些空間結(jié)構(gòu)或者序列發(fā)生小變化或者部分抗原決定簇變化，仍可以識(shí)別抗原，因此有更大的適應(yīng)性。
多克隆抗體制備的常見問(wèn)題解析：
1、免疫動(dòng)物該如何選擇？
選擇宿主動(dòng)物時(shí)，一般要考慮兩個(gè)問(wèn)題：
?。?）免疫效果能否保證。特別是對(duì)于蛋白抗原的情況，為了保證免疫成功，就要求宿主動(dòng)物與抗原來(lái)源物種之間有較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系，如果不太能確定親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，建議把抗原的序列與被免疫的動(dòng)物相應(yīng)的蛋白的序列進(jìn)行一個(gè)對(duì)比，優(yōu)先選擇同源性較低的物種進(jìn)行免疫。
（2）抗血清產(chǎn)量的問(wèn)題。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，抗血清的用量也有所不同?/div>
如果后續(xù)是做Western Blot，那么只需要一點(diǎn)點(diǎn)血清就夠了，這個(gè)時(shí)候就可以選用小鼠這樣的小動(dòng)物作為免疫動(dòng)物，而如果想生產(chǎn)二抗作為商業(yè)使用，則可選用羊、驢、馬這樣的大型動(dòng)物，大型動(dòng)物還可以進(jìn)行多次放血，以提高動(dòng)物的利用率
2、如何選擇抗原？
?。?）降解的蛋白抗原利于制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)cDNA文庫(kù)或免疫沉淀。
（2）用于篩選真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染系統(tǒng)表達(dá)的cDNA文庫(kù)或免疫沉淀，建議選用自然的蛋白抗原。
?。?）如果制備抗*型抗體，所用抗原可以是可溶性Ig分子，或者是完整的細(xì)胞，也可以是基因工程表達(dá)產(chǎn)品*型決定簇、人工合成多肽及抗原化抗體等。
目前，以各類病原生物活體感染動(dòng)物而獲得多克隆抗體（抗血清）作為檢測(cè)抗體，仍是常用方法。
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更新時(shí)間：2022-01-13
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