細(xì)胞培養(yǎng)基的pH一般在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖體系是一種生理pH緩沖體系(是人體血液中最重要的pH緩沖體系)，大多數(shù)培養(yǎng)基都是用它來維持穩(wěn)定的pH值，用粉末配制培養(yǎng)液時，往往需要加入一定量的碳酸氫鈉。

對于大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖體系的培養(yǎng)液，為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以維持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳濃度。同時，用于細(xì)胞培養(yǎng)的容器需要一定程度的通風(fēng)，以便于氣體的交換。

使用其他pH緩沖系統(tǒng)是否不需要二氧化碳培養(yǎng)箱？已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，由于空氣中二氧化碳濃度低，如果細(xì)胞不在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液中的HCO 3-將被耗盡，這將影響細(xì)胞的正常生長。因此，大多數(shù)動物細(xì)胞的培養(yǎng)仍然需要二氧化碳培養(yǎng)箱。

細(xì)胞培養(yǎng)基中常加入其他pH緩沖體系，如HEPES緩沖體系，以增加pH緩沖容量。HEPES在pH7.2-7.4有很強的緩沖能力。當(dāng)可呼吸的培養(yǎng)容器從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出時，培養(yǎng)液中的碳酸鹽緩沖體系會因為空氣中二氧化碳濃度低而失去作用。此時HEPES的緩沖體系可以保持pH穩(wěn)定。